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一种提取分离神经节苷脂的方法

文档序号:9390738
一种提取分离神经节苷脂的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制药领域,具体的说是涉及一种提取分离神经节苷脂的方法。
【背景技术】
[0002] 神经节苷脂是最复杂的鞘糖脂,微量地存在于脊椎动物几乎所有的组织中,但在 哺乳动物的大脑和脊髓组织中含量最高,约含0. 3%左右(RobertW.Ledeen,RobertK.Yu, MethodsinEnzymology. 1982,83:139-191)。哺乳动物脑和脊髓组织中主要的神经节苷脂 为GM1、⑶lb、⑶la和GTlb等。神经节苷脂分子的生理功能主要包括:1)作为膜脂质双层 和细胞糖萼的组分;2)维持膜表面负电荷;3)参与细胞识别与信号传递;4)保护缺血(氧) 性神经损害等(唐向东,生命的化学,1995,15 (2),32-34)。神经节苷脂呈乳白色粉末状,无 味,具吸湿性,可溶于水,在水溶液中呈高度规律性的球形聚合体,也可溶于甲醇-水溶液 和甲醇-氯仿溶液,微溶于甲醇,不溶于氯仿、丙酮、乙醚、乙酸乙酯及乙醇,平均分子量为 1800Da左右。
[0003] 伴随神经节苷脂生理功能及药用价值的不断研究与应用,从机体 组织中提取分离神经节苷脂的方法也不断获得研究和发展。如J.Folch,M. Lees,andG.H.SloaneStanley,JBiolChem, 1957,226 (1) :497 - 509;Suzuki K.JNeurochem. 1965, 12 (7) :629-638;TettamantiG,BonaliF,Marchesini S,ZambottiV,BiochimBiophysActa. 1973, 19 ;296 (1) :160-170 ;Phi11ips F,Privett0S,Lipids, 1979, 14 (6) : 590-595;SvennerholmL,Fredman P,BiochimBiophysActa. 1980,617 (1) :97-109;LedeenRff,YuRK,Methods Enzymol, 1982,83:139-191;ByrneMC,Sbaschnig-AglerM,AquinoDA,Sclafani JR,LedeenRff,AnalBiochem,1985, 148 (1) :163-73;ffangWQ,GustafsonA,Acta ChemScand, 1995, 49 (12) : 929-36;LydicTA,BusikJV,ReidGE,JLipid Res, 2014, 55(8) : 1797-1809等文献系统描述了从神经组织中提取分离神经节苷脂的方 法及发展,这些方法都是基于J.Folch提出的以氯仿-甲醇混合溶剂为组织脂类物质 提取溶剂,然后再通过增加水份比例的分配分离法使神经节苷脂与其他脂类物质分离 以获得神经节苷脂的经典方法的修正与完善。DiazRS,MonrealJ,RegueiroP,Lucas M,JNeurosciRes. 1992, 31 (1) : 136-145等文献提出以四氢呋喃为溶剂进行组织脂类物 质的提取,然后通过增加乙醚进行两相分配分离获得神经节苷脂。HeitmannD,Lissel M,KempkenR,MUthingJ,BiomedChromatogr. 1996, 10 (5): 245-250 等文献描述了 以正丙 醇-水(40:10,v/v)和甲基异丁基酮-甲醇-水(40:80:30,v/v/v)混合溶剂体系为提取 溶剂替代氯仿-甲醇-水提取溶剂进行组织中神经节苷脂的提取,以期希翼规避氯仿溶剂 的使用。SchwarzA,TerstappenGC,FutermanAH,AnalBiochem. 1997, 254 (2): 221-225; TerstappenGC,FutermanAH,SchwarzA,MethodsEnzymol, 2000, 312:187-196 等文献描 述用一种叫C14E06的非离子去垢剂形成胶束进行神经节苷脂的提取分离。国内文献涉及 从神经组织中提取分离神经节苷脂的描述几乎都是沿用J.Folch的氯仿/甲醇混合溶剂提 取及分配分离法。(朱正美等,上海第一医学院学报,1983, 03:234-236 ;夏霞娟等,生物化 学杂志,1985,02:13-17 ;夏霞娟等,生物化学与生物物理进展,1985,05:27-31 ;夏霞娟等, 上海第一医学院学报,1985,06:467-470 ;欧阳启楣等,大连医学院学报,1987,01:8-12 ;崔 肇春等,生物化学与生物物理进展,1990,03:206-209 ;张新波等,生物化学与生物物理进 展,1990, 03:243-244 ;陈荣等,安庆师范学院学报(自然科学版),1992, 01:1-9 ;张新波等, 生物化学与生物物理进展,1992,06:477-478 ;潘颖等,生物化学杂志,1994,04:387-391 ; 潘颖等,生物化学与生物物理进展,1994,04:353-356+380 ;黄如彬等,生物化学与生物物 理进展,1994,05:444-446+476 ;高剑峰等;氨基酸和生物资源,1996,04:5-8 ;王江雁等,生 物化学与生物物理进展,1997, 01:75-78 ;侯卫红等,白血病,1997, 01:12-15 ;李钦选等,新 乡医学院学报,1997,01:46-49)
[0004] 自FIDIA企业在20世纪80年代首先把牛脑来源的混合神经节苷脂开发为临床 周围神经系统疾病用药以来,先后有FIDIA企业的混合神经节苷脂"Cronassial?"、单唾 液酸四己糖神经节苷脂钠"Sygen?",上市销售,其后国内齐鲁药业的单唾液酸四己糖神 经节苷脂钠"申捷"也在国内首先上市销售,神经节苷脂的药用研究及开发利用日趋成为 热点。FIDIASPA企业于20世纪70年代开始陆续公开制备神经节苷脂的方法(公开号 FR2320760A1、JPS5234912A、GR61663A1、JPS62187412A、IN171530A1、US2003153517A1), 其系列方法中对于从牛脑或猪脑中进行神经节苷脂提取与分离的方法都是沿用J.Folch 提出的以氯仿-甲醇混合溶剂为主的提取液从组织中进行脂类物质的提取,然后用分配 分离法获得神经节苷脂的方法。同时,其他的诸多机构公开的相关的从组织中进行神 经节苷脂提取与分离方法亦是如此(公开号EP0150712A2、CA2002155A1、EP0319890A1、 EP0409473A2、US5532141A、CN1158295C、CN101108868A、CN101838295A、CN102731584A、 CN103524572A)。略有不同的是,日本国MITSUITOATSUCHEMICALS企业在1985年曾公开 了一种提取分离制备神经节苷脂的方法(公开号JPS60181019A),该方法以甲醇为溶剂替 代JFolch经典方法的氯仿-甲醇-水溶剂体系进行加热提取和降温冷却获得脂类物质, 然后再把脂类提取物溶解在氯仿-甲醇溶剂体系中参照JFolch经典方法进行分配分离获 得神经节苷脂,以期减少氯仿和甲醇溶剂的用量。
[0005] 其他机构也陆续公开了一些与J.Folch经典方法相当不同的方法。中科院上海 生理所在1999年公开了一种以酒精-石油醚混合溶剂提取动物脑组织获得含神经节苷 脂的提取物制备保健食品的方法(公开号CN1046734C)。吴浩青于2007年公开了一种用 "有机溶液-缓冲溶液"混合萃取体系进行动物组织神经节苷脂成分提取的方法(公开号 CN101003553A),其中有机溶剂包括氯仿、甲醇、四氢呋喃、乙醚。上海绿谷企业2004年公开 了一种在不高于室温条件下用含水酒精提取动物鲜脑组织中神经节苷脂的方法(公开号 CN1535974A)。鲁南制药集团2008年公开了一种基于鲜脑组织原料用甲醇溶液在低温(2~ 8°C)条件下提取神经节苷脂成分的方法(公开号CN101177439A),2011年又公开了一种基 于鲜脑组织用无水乙醇提取神经节苷脂的方法(公开号CN102093440A)。湖北利诺生物药 业企业2014年公开了一种用甲醇-碱水混合溶剂提取经酸处理过的鲜脑组织获得神经节 苷脂成分的方法(公开号CN104151372A)。长春英联生物技术企业于2008年公开了一种应 用C02超临界萃取法进行脑组织神经节苷脂成分的提取方法(公开号CN101270137A)。北 京赛生药业于2010年公开了一种用含非离子型
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